【每日一题】残留溶剂检查方法与满足检测灵敏度要求

姜连革一、概述 药物残留溶剂是指在原料药或赋形剂生产过程中，以及在制剂制备过程中使用，但在过程中未被完全去除的有机溶剂。根据有机溶剂的毒性和对环境的危害，ICH将有机溶剂分为四类：避免使用、限制使用、低毒和毒性不足。残留溶剂需要研究，因为它们会影响产品的安全性。二、残留溶剂检测方法选择残留溶剂一般采用气相色谱法测定。推荐使用毛细管柱顶空进样系统。当然，也可以使用普通的填充柱。溶液直接注射法 来源：医学教育网。对于不适合用气相色谱法测定的含氮碱性化合物，如N-甲基吡咯烷酮，可采用其他方法，如离子色谱法。残留溶剂的确定应从以下几个方面考虑：确定待测有机溶剂、选择合适的色谱柱、制备供试品溶液和参比溶液、选择合适的进样方法和满足检测灵敏度要求的检测器。简介：1、确定待测有机溶剂根据制备工艺确定待测有机溶剂的范围。通常，制备过程中使用的两种或多种溶剂和重结晶溶剂的残留量，以及工艺特性所需的其他溶剂，应进行研究。建议研究合成的最后三个步骤中使用的三种溶剂，以便更好地分配未知峰；还建议调查制备过程中使用的有机溶剂的残留物，尤其是缓控释微丸。应更加注意涂层过程中使用的有机溶剂。

残留溶剂的限量要求与ICH规定的相同。2、选择合适的色谱柱，按照兼容性相似的原则选择色谱柱。毛细管柱有极性、非极性、弱极性和中等极性。填充柱包括聚合物多孔珠或涂有合适固定剂的填充柱。在含氮碱性有机溶剂的测定中，由于普通气相色谱仪的不锈钢管路和进样器内胆对有机胺等含氮碱性化合物有很强的吸附作用，降低了检测灵敏度。. 含氮碱性有机溶剂通常采用弱极性色谱柱或碱处理色谱柱进行分析。3、 顶空进样法制备供试品和参比品通常使用水作为溶剂。对于非水溶性药物，可以使用 DMF、DMSO 或其他合适的溶剂。溶液直接注入法将样品溶解在水或合适的溶剂中。制备供试品的溶剂选择应考虑供试品和待测有机溶剂的溶解度，所用溶剂不应干扰待测有机溶剂的测定。水是首选的溶剂，特别是对于顶空进样系统。由于水不含有机溶剂，干扰较小，而且在FID检测器上，以水为溶剂时，每种残留溶剂的灵敏度最高。当药物不溶于水时，可加入适当的酸或碱以增加药物的溶解度，优选非挥发性酸或碱。以DMSO为溶剂时，可加入一定量的水以提高检测灵敏度，也可采用盐析的方法提高灵敏度。测量含氮碱性溶剂时，试样溶液不应呈酸性，以免分析物与酸反应后易气化。

对照品的制备方法应与供试品的制备方法相同。在申请材料中发现，对照品（溶液）是直接进样的，供试品是固体直接顶空进样。相比。提请报告单位注意。4、测试溶液和参比溶液浓度的测定。配制的供试品溶液的浓度应满足定量测定的需要。一般试液的取样量在0.1～1g之间。对照品溶液的浓度可在限量检验时按规定的限量配制，定量时按实际残留量配制，浓度差最好不超过2倍。5、检测器的选择一般是FID检测器。对于氯仿等含卤素的有机溶剂，可以使用ECD检测器获得更高的灵敏度。通常可以根据药物溶剂的残留情况选择合适的检查方法。当要检查的有机溶剂数量较少且极性差异较小时，可选择毛细管柱-顶空进样-等温法。当要检查的有机溶剂数量较多，极性和沸点差异较大时，可选择毛细管柱-顶空进样-程序升温法；直接进样法也可选择填充柱或具有合适极性的毛细管柱。限度检查采用内标法或外标法（Ⅰ类和部分Ⅱ类溶剂）；内标法用于定量（含量超过0.1%的II类溶剂或需要定量控制的III类溶剂）。或标准添加方法。顶空进样方法还可以选择顶空温度和顶空时间。顶空温度应根据溶解供试品的溶剂特性和供试品中残留溶剂的沸点来选择。@0.1% 或需要定量控制的 III 类溶剂）。或标准添加方法。顶空进样方法还可以选择顶空温度和顶空时间。顶空温度应根据溶解供试品的溶剂特性和供试品中残留溶剂的沸点来选择。@0.1% 或需要定量控制的 III 类溶剂）。或标准添加方法。顶空进样方法还可以选择顶空温度和顶空时间。顶空温度应根据溶解供试品的溶剂特性和供试品中残留溶剂的沸点来选择。

使用水作为溶剂并测量低沸点残留溶剂时，顶空温度不应超过 85 °C；测量沸点较高的残留溶剂时，通常选择较高的顶空温度；但是，应考虑测试样品的热分解特性。，尽量避免测试产品产生的挥发性热分解产物对测量结果的干扰。使用 DMSO 作为溶剂时，顶空温度不应超过 115℃。例如，在应用资料中发现，以水为溶剂，顶空温度为100℃，柱温为60℃，高浓度乙腈的峰面积小于乙腈的峰面积。低浓度二氯甲烷特戊酸溶剂残留检测，由于顶空温度过高，大量水被蒸发（或浓度被稀释），随着水蒸气的冷凝，易溶于水的乙腈的灵敏度降低，导致实验结果为与事实不符。顶空时间是为了保证供试品溶液的气液两相达到平衡，一般通过测量顶空时间和顶空气体浓度的浓度-时间曲线来确定。顶空时间不宜过长，一般为 30 至 45 分钟。如果超过 60 分钟，可能会导致顶空瓶的气密性变差，从而导致定量准确度下降。如果选择平衡时间为 10 分钟，不能保证气液两相的平衡。请注意，参考溶液和测试溶液必须使用相同的顶空条件。甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不适合用顶空法测定。三、残留溶剂检查法验证1、系统适用性测试 柱效：以分析物的色谱峰计算，填充柱法的理论塔板数应大于1000，理论塔板数毛细管柱数应大于 1000。应大于 5000。乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不宜用顶空法测定。三、残留溶剂检查法验证1、系统适用性测试 柱效：以分析物的色谱峰计算，填充柱法的理论塔板数应大于1000，理论塔板数毛细管柱数应大于 1000。应大于 5000。乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不宜用顶空法测定。三、残留溶剂检查法验证1、系统适用性测试 柱效：以分析物的色谱峰计算，填充柱法的理论塔板数应大于1000，理论塔板数毛细管柱数应大于 1000。应大于 5000。

分辨率：色谱图中分析物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。重复性：采用内标法测定时，参比溶液连续进样5次，分析物峰面积与内标物之比的相对标准偏差（RSD）不应大于大于 5%；外标法测定时，所得分析物峰面积的相对标准偏差（RSD）不应大于10%。2、精度在规定范围内，至少9个测量结果。设计了三种不同的浓度进行测定，计算了回收率和相对标准偏差。含量测定的回收率应大于98%。回收率试验时，由于采用顶空进样系统，供试品和对照品处于不同的基体中，此时应考虑气液平衡过程中的基体效应。加标法可以消除因供试溶液和参比溶液的基体不同而造成的基体效应的影响，因此通常采用加标法来验证定量方法的准确性。当标准添加法的结果与其他定量方法不一致时，以标准添加法的结果为准。加标法是精密称取（定量）适量待测残留溶剂对照品，配制成适当浓度的对照品溶液特戊酸溶剂残留检测，取一定的精密度加到供试品溶液中，测定残留溶剂按外标法或内标法测定。减去加入的对照品溶液的含量，得到供试品溶液中残留溶剂的含量；或残留溶剂量按下式计算。Cx=ΔCx/[(Ais/Ax)-1]，其中Cx为供试品中组分X的浓度；Ax为供试品中组分X的色谱峰面积；ΔCx 为加入已知浓度的被测组分对照品；

3、专门定位各种残留溶剂，对混合溶剂进行分辨率测试，有代表性的图。待测产品中的未知杂质或其挥发性热降解产物可能会干扰残留溶剂的测定。如果未知杂质或其挥发性热降解产物与分析物具有相同的保留值（共峰），或者如果热降解产物与分析物具有相同的结构（如甲氧基热裂解产生甲醇），则测试应通过测试避免分心。对于第一类干扰，通常用于在另一个极性相反的色谱柱系统中测量同一样品，并比较不同色谱系统的测量结果。如果两者的结果一致，可排除共峰对测定的干扰；如果两者的结果不一致，说明测定中存在共峰的干扰。第二种干扰通常通过测量已知不含溶剂的对照样品来判断。4、其他可根据限度检查或定量确定选择具体验证内容。精密度：在规定范围内，至少 9 次测定的重复性和再现性。设计了三种不同的浓度进行测定。一般保留时间的RSD小于1%，峰面积的RSD小于5%。线性：至少制备了 5 个浓度，R=0.99。附有回归方程、相关系数和线性图。检出限和定量限：检出限是信噪比为3:1或2:1时对应的浓度或注入仪器的量。定量限需要在定量时进行验证，限为信噪比为10:1时对应的浓度或注入仪器的量。同时说明了测试的过程和结果，并附上了一张图谱。以上是对残留溶剂检测方法研究的一些意见和建议，供大家参考。定量限需要在定量时进行验证，限为信噪比为10:1时对应的浓度或注入仪器的量。同时说明了测试的过程和结果，并附上了一张图谱。以上是对残留溶剂检测方法研究的一些意见和建议，供大家参考。定量限需要在定量时进行验证，限为信噪比为10:1时对应的浓度或注入仪器的量。同时说明了测试的过程和结果，并附上了一张图谱。以上是对残留溶剂检测方法研究的一些意见和建议，供大家参考。

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