蛋白绝对定量技术及翻译后修饰分析介绍(一)

蛋白质组学是一门研究细胞、组织或生物体中蛋白质的组成及其变化规律的科学。蛋白质组学技术可用于大规模研究蛋白质的特征，包括蛋白质表达水平、翻译后修饰、蛋白质-蛋白质相互作用等，从而获得对疾病发生、细胞代谢和蛋白质水平的其他过程。意识。

本专题将重点介绍蛋白质组学技术的介绍和应用场景，主要介绍相对蛋白质定量技术、绝对定量技术和蛋白质修饰分析的原理和技术优势、蛋白质组学的常用研究模式、蛋白质样品制备的注意事项和经典案例解读， ETC。

今天的内容主要是介绍绝对蛋白定量技术和翻译后修饰分析。让我们一起学习。

1.蛋白质绝对定量技术

质谱多反应监测技术/选择性反应监测（mrm/srm）是对复杂混合物中靶蛋白进行定量（绝对定量/相对定量）的重要技术手段。通过mrm/srm技术进行实时定量监测，可用于药代动力学研究、临床诊断、食品和化妆品等工业质量控制、环境检测、农业植物学研究以及基于代谢组学和蛋白质组学的生物标志物发现、翻译后研究蛋白质的修饰。

mrm/srm技术的优势在于：①质谱定量方法的金标准，被称为“基于质谱的ELISA”；② 目前基于质谱的重现性最强的技术，通量高，一个实验可以并行量化几十到数次 3. 重复性高，可以实现四个数量级的量化，变化很小；4. 无需抗体，适用于因缺乏抗体而无法通过Western或ELISA定量的蛋白质的验证和定量。

MRM实验过程

该方法首先检测特定的肽段，然后仅选择特定的亚肽段进行质谱信号采集。最后，通过合成同位素形成的目标肽段，将已知浓度的内标肽与待测样品混合，选择特定的亲子离子对蛋白质组分析，获得不同的色谱检测信号，并比较信号强度值两者达到目的蛋白。绝对量化。

2.蛋白质修饰分析

生物体中许多重要的生命过程不仅受蛋白质相对丰度的控制，还受各种时空分布和可逆的翻译后修饰的调节。因此蛋白质组分析，揭示翻译后修饰的发生规律是分析生物体中复杂多样的蛋白质的重要​​途径。功能的重要前提。

当蛋白质进行翻译后修饰时，其分子质量会发生相应的变化，质谱可以准确地确定蛋白质或多肽的分子质量。同时，翻译后修饰的蛋白质在样品中含量较低，动态范围较宽，因此在质谱检测前需要对修饰后的蛋白质或多肽进行富集。

蛋白质修饰分析

注：①含有非极性、疏水性R基团的氨基酸：甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、Pro氨基酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸（Trp）、蛋氨酸（Met）；②含有极性和中性R基团的氨基酸：丝氨酸(Ser,)苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、酪氨酸(Tyr)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)；③含有酸性R基团的氨基酸：天冬氨酸（Asp，）谷氨酸（Glu）；④含有碱性R基团的氨基酸：赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)。

磷酸化分析工作流程