研究当归提取物及佛手柑内酯对ITR体外细胞转运的影响

【摘要】一、目的：通过建立Caco-2细胞模型，预测和筛选可能与当归提取物及其呋喃香豆素相互作用的药物；内酯对伏立康唑 (VOR) 和伊曲康唑 (ITR) 体外细胞转运的影响。初步探讨了当归提取物和佛手内酯与VOR和ITR的相互作用机制当归提取物，为临床安全用药提供理论依据。 二、方法一Caco-2细胞单层模型的建立和确认为了研究当归提取物和佛手内酯对VOR和ITR体外细胞转运的影响，采用Caco-2细胞培养方法用于建立体外Caco-2细胞单层模型。通过荧光素和普萘洛尔的细胞形态、免疫荧光、渗透性和跨膜电阻 (TEER) 验证 Caco-2 的鉴定。 2.当归提取物、佛手内酯、VOR和ITR对Caco-2细胞的细胞毒性分别采用溴化苯基四唑法(MTT)研究。当归醇提物（AE）、当归水提物 考察水提物（当归，AW）、佛手内酯（Bergapton，BGT）、VOR和ITR对Caco-2细胞的毒性，细胞活力大于的药物浓度选择 90% 作为下一步的非细胞毒性剂量。实验。

3当归提取物和佛手内酯对VOR体外细胞转运的影响建立了高效液相色谱法测定转运和摄取实验中VOR的浓度，并对该方法进行了验证。在建立的体外Caco-2细胞单层模型中，研究了VOR的双向跨膜转运，比较了不同药物对VOR双向转运的差异。单独使用 VOR 作为对照组。采用高效液相色谱法测定样品中VOR的浓度，计算表观渗透系数Papp和流出速率ER。研究了常规培养的 Caco-2 细胞对 VOR 的摄取，比较了不同药物对 Caco-2 细胞摄取 VOR 的差异。 VOR 单独用作对照组。通过 HPLC 测定样品中 VOR 的浓度。 4.当归提取物和佛手内酯对ITR体外细胞转运的影响建立了高效液相色谱法测定转运和摄取实验中ITR浓度的影响，并对方法进行了验证。在建立的体外Caco-2细胞单层模型上研究了ITR的双向跨膜转运，比较了不同药物组合的ITR双向转运的差异。单独使用 ITR 作为对照组。采用高效液相色谱法测定样品中ITR的浓度，计算表观渗透系数Papp和流出速率ER。在常规培养的Caco-2细胞中研究了细胞对ITR的摄取，并比较了不同药物对Caco-2细胞ITR摄取的差异。单独使用 ITR 作为对照组。通过 HPLC 测定样品中 ITR 的浓度。 三、结果1 Caco-2细胞单层模型的建立，Caco-2细胞在正常条件下生长旺盛。 (TEER)验证，均满足Caco-2细胞单层模型的要求。

可用于研究当归提取物及其活性成分对VOR和ITR的相互作用。 2 当归提取物、佛手内酯、VOR和ITR对Caco-2细胞的24小时MTT毒性试验结果表明AE、AW、BGT、VOR和ITR对Caco-2细胞的最大无毒浓度为250 μg · mL-1、250 μg·mL-1、30 μg·mL-1、40 μg·mL-1和50 μg·mL-1。选择20μg·mL-1ITR和VOR、5、20μg·mL-1BGT、100、200μg·mL-1AE和AW进行进一步研究。 3 当归提取物和佛手内酯对体外 VOR 细胞转运的影响 VOR 跨 Caco-2 细胞单层细胞转运模型的结果表明，与单独 VOR 对照组相比，VOR+AW 组的外排率显着增加，外排VOR+AE组发生率显着降低，而VOR+BGT组无显着差异。以上四组的外排率ER=Pappba/Pappab≥1.71，说明VOR在转运过程中主动转运，可能被其他载体转运。 Caco-2细胞对VOR的摄取结果显示，与单独使用VOR的对照组相比，VOR+BGT组和VOR+AE组对Caco-2细胞对VOR的摄取没有显着影响，而VOR+AW组对 Caco-2 细胞的 VOR 摄取没有显着影响。 Caco-2细胞摄取显着降低，两种剂量无显着差异。

说明：在Caco-2细胞上，AW可显着降低VOR的摄取，而BGT和AE无显着差异，且不受联合用药剂量的影响。 4当归提取物及其活性成分对ITR体外细胞转运的影响ITR转运实验结果表明，与单独使用ITR的对照组相比，ITR+AW组的外排率明显增加； ITR+BGT组和ITR+AE组外排率明显降低，外排率受到抑制：ITR+BGT组ITR+AE组。 BL-AP 方向的表观渗透系数是 AP-BL 方向的 2 倍，以上 4 组的外排速率为 ER=Pappba/Pappab≥1.03当归提取物，提示 ITR 是运输过程中的活性载体。运输。 ITR摄取实验结果表明，与单独使用ITR的对照组相比，ITR+BGT组Caco-2细胞对ITR的摄取显着增加，ITR+BGT组Caco-2细胞对ITR的摄取显着增加。 AW组明显下降。 ITR+AE组对Caco-2细胞的摄取无显着差异；两种剂量之间没有显着差异。说明 BGT 显着增加 Caco-2 细胞对 ITR 的摄取，而 AW 显着降低 ITR 的摄取，而 AE 无显着差异且不受联合用药剂量的影响。 四、结论1.当归醇提物对伏立康唑和伊曲康唑的外排有一定的抑制作用；2.当归水提液对伏立康唑和伊曲康唑的外排有一定的抑制作用有一定的诱导作用；3.佛手柑内酯对伊曲康唑的外排有一定的抑制作用。