双分子荧光互补标记技术在蛋白互作研究中取得绿色荧光的GFP

时间：2022-04-28 08:56:39来源：网络整理

下村等人。从水母中分离纯化的绿色荧光蛋白。马丁·查尔菲等人。首次在大肠杆菌中成功表达出能产生绿色荧光的GFP。目前，GFP的应用已经涉及分子生物学、细胞生物学和临床医学等多个学科。GFP作为报告基因，已广泛应用于亚细胞定位、蛋白质相互作用等多个系统，成为重要的研究方法。蛋白质相互作用是细胞的基本生理功能。GFP发光原理可用于有效检测体内蛋白质的相互作用。有两种方法：双分子荧光蛋白互补和荧光共振能量转移。BiFC是一种基于GFP发光原理验证蛋白质间相互作用、检测其相互作用强度、定位蛋白质相互作用位点的新技术。GFP 在特定位点被切割，形成非荧光的 N 端和 C 端，分别与两个相互作用的靶蛋白相连。当两种融合蛋白在细胞内共表达或在体外混合时，由于靶蛋白的相互作用，荧光蛋白的两个片段在空间上相互靠近，相互补充，重构成一个完整且活性荧光蛋白分子。现有研究表明，BiFC 技术可广泛用于研究许多具有不同结构和功能的蛋白质相互作用和修饰。该技术也被广泛应用于不同实验室的不同细胞系和生物体蛋白质的互补最常用的是，在任何实验材料体系中均未发现不适用。虽然 BiFC 系统出现的比较晚，但很快就得到了应用。目前，双分子荧光互补标记技术在蛋白质相互作用研究中的应用主要涉及转录因子的相互作用及其亚细胞定位、G蛋白与α和β亚基的相互作用、各种蛋白质家族及其相关伙伴。蛋白质之间的相互作用，信号转导级联，酶-底物复合物的测定，蛋白质复合物定位的调节，涉及转录后修饰的相互作用，新相互作用蛋白质的监测，大分子复合物和分子支架等。由于条件限制蛋白质的互补最常用的是，传统研究中对这些蛋白质存在各种推测和质疑，但随着BiFC技术在研究中的应用，各种推测逐渐得到解决，尤其是蛋白质家族以及相关伴侣蛋白之间的关系。交互研究。传统的伴侣蛋白研究一直存在差距。虽然有各种迹象证明它的存在，但没有直接的手段来观察或提取伴侣蛋白。利用BiFC技术，我们可以在荧光显微镜下直接观察分子伴侣的生物学过程，这也有利于我们研究蛋白质家族或群体的合作。虽然 BiFC 技术仍然存在许多无法克服的缺陷，但我们必须承认，双分子荧光互补标记技术为我们的蛋白质相互作用研究开辟了新的途径。并且随着 BiFC 技术的改进和更合适的 GFP 变体的出现，蛋白质相互作用的研究将会得到更好的发展。

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