超滤离心管如何在20%的乙醇中保存？Ultra15ml

时间：2022-08-16 12:02:28来源：网络整理

[帮助] 我将使用微孔超滤离心管从细胞培养上清液中浓缩蛋白质。我在花园里找到了一些关于浓缩蛋白的帖子，但仍有一些问题。我还是向园里的大虾们请教。

我们订购了 Amicon Ultra 15 毫升试管。不知道以前有没有人做过。请给一些关于速度和时间的建议。另外，离心前细胞上清液是否需要预处理？

如何在离心后回收蛋白质时尽量减少损失？

如果要重复使用试管，用 NaOH 清洗后如何保存在 20% 乙醇中？ 4度的时候是蘸乙醇防止的，还是管子里装的是乙醇？

【答题要点】

propeg

我用的是5ml的试管，转速4000rpm，8分钟，可以将5ml的样品溶液浓缩到200ul左右。仅供参考超滤离心管，具体情况以您的样品为准。

我存放 5ml 试管的方法是将内试管取出并浸泡在 20% 乙醇的烧杯中。四次扑救。

这种管子可以脱盐浓缩，但根据截留半径不适合蛋白质分离。

我用3500g 4度离心，时间可以自己控制，看你的最终浓缩体积，我一般用200ul左右。

不要离心太久。不同的蛋白质以不同的速度浓缩。有些需要长时间的离心，而有些则很好。当然，这也和你的蛋白质是否比较纯，用什么缓冲液，蛋白质的浓度有关。因此，离心时，应短时间观察自己的浓缩速度。不要一下子全部凝结，甚至形成沉淀超滤离心管，这得不偿失。

另外，他们的管子是一次性设计的，所以如果你想重复使用，不要把速度开得太高，4000-4500RPM几乎是一样的，重复使用的时候检查一下有没有是管壁上的任何裂缝。现在的管子似乎不像以前那么坚固了。

使用后，用纯净水清洗试管。当离心力很小时，清洗膜，然后按照propeg主任说的把它收起来。如果用了很多次感觉有点堵，可以用NaOH气泡，离心几分钟，应该会有改善的。

祝实验顺利。

纯化多肽的分子量截止值可选择10倍，纯化球蛋白的分子量截止值可选择3倍。如果管子要重复使用，转速应设置在最大转速（G）的80%左右，否则塑料时间长了会开裂。，膜也容易出问题。

离心后，用MilliQ水清洗试管，浸泡在水中，4度保存。不放心可以放一些防腐剂，不过这个管以后只能用于类似样品的离心。

超滤会丢失蛋白质是正常的。如果样品量很大，请分批离心。不要做太久。如果可能，在离心前尽量去除样品中的一些杂质。

超滤离心管 如何在20%的乙醇中保存？Ultra15ml