内蒙古自治区地方标准DB15/T26022022苜蓿中咪残留量残留量的测定高效

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1、ICS65.020.01CCSB 2515 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 26022022 苜蓿中咪草烟残留量的测定-高效液相色谱法2022- 06-24 发布 2022-07-24 实施DB15/T 26022022 内蒙古自治区市场监督管理总局发布 前言 II1 范围 12 规范性引用文件 13 术语和定义 14 原理 15 试剂和材料 16 仪器和设备 27 样品制备 28 测定步骤 29 结果计算与表示 310 精密度 4 附录A (

2、Informative) 高效液相色谱法测定咪草烟标准溶液 5I 前言 本文件按照GB/T 1.12020 标准化工作指南第1 部分：标准化文件的结构和起草规则法规。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19））归口。本文件起草单位：中国农业科学院草原研究所、内蒙古自治区农畜产品质量安全中心、内蒙古自治区产品质量检验所、太浦寺旗现代农牧业综合服务中心。本文件主要起草人：吴红新，

3、文件规定了高效液相色谱法测定紫花苜蓿中咪草烟残留量的原理、试剂和材料、仪器和设备、样品制备、测定步骤、计算和结果表示、精密度等。本文件适用于紫花苜蓿中咪草烟残留量的测定。本文件的检测限为 0.025 mg/kg。本文件的定量限为 0.10 mg/kg。2 规范性引用文件 下列文件的内容通过正文中的引用性文件构成本文件的必要条款。其中，凡注明日期的引用文件，本文件仅适用与日期对应的版本；对于未注明日期的参考资料，最新版本（包括所有修改）适用于本文件。GB/T 14699.1 饲料取样 GB/T 20195 动物饲料样品的制备 3 术语和定义 本文件中没有需要定义的术语和定义。4 原理 样品中的咪草烟残留样品经甲醇处理

4、和碳酸钠萃取，离心，萃取，旋转蒸发，用离子交换（SCX）固相萃取柱纯化，甲醇和氨水洗脱，高效液相色谱，外标法定量。5 试剂和材料乙腈（CH3CN）：色谱纯。甲醇 (CH3OH)：色谱纯。磷酸（H3PO4）：优级。二氯甲烷（CH2Cl2）。冰醋酸（CH3COOH）：优级。氨（NH4OH）。无水硫酸钠（Na2SO4））：优级.碳酸钠（Na2CO3）：优级。碳酸钠溶液（0.1mol/L）：称取10.6g碳酸钠，溶于水，测定成1 L 容量瓶。

5、L碳酸钠溶液（5.9），搅拌均匀。磷酸溶液（1+9，v/v）：量取10mL磷酸，用水稀释至100mL . 氨水-甲醇 (1+9, v/v)：量取 10 mL 氨水，加入 90 mL 甲醇，充分混合。 水+甲醇 (1+9, v/v)：量取 10 mL 水，加入 90 mL甲醇，混匀。醋酸溶液（5+95，v/v）：量取冰醋酸5mL，加水稀释至100mL 标准物质：咪草烟（C15H19N3O3）：纯度不低于95%),或经国家认证并颁发标准物质证书的标准物质 标准储备溶液(1.00 mg/mL):准确称取适量咪草烟标准物质,用甲醇溶解后制备(1.00 mg/mL) 标准储备溶液，保留

6、在-18 冰箱中存放6 个月。标准溶液：准确吸取0.10 mL咪草烟（5.16)标准储备液于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制备1 0.0 g/mL标准溶液，-18冰箱避光保存，可使用1个月 标准系列工作溶液：分别吸收浓度为10.0 g/mL标准品0.25 mL, 0.50 mL, 1.00 mL, 1.50 mL, 2.00 mL at 10.00 mL 容量瓶，稀释加水+甲醇至刻度（5.13)，咪草烟标准系列浓度为0.25 g/mL，0.50 g/mL，< @1.00 克/毫升，1.50 克/毫升，2.00 克/毫升。

7、60 毫克/3 毫升。微孔滤膜（尼龙）：13 mm0.22 m。注：除另有规定外，仅使用经确认为分析纯的试剂和 GB/T 6682 规定的一级水进行分析。6 仪器和设备 高效液相色谱仪：配备紫外检测器（或二极管阵列检测器）。电子天平：灵敏度 0.01 mg 和 0.01 g。离心机：转速大于等于4000 r/min。超声波水浴。旋转蒸发器。涡流混合器。氮气鼓风机。组织粉碎机。样品筛：目数1.0 mm。7 制样 按GB/T 14699.1的有关规定采集样品，去除杂质后充分混匀，按GB/T 20195制备样品，

8、样品留作以后使用，处理后的样品应存放在-18冰箱中。8 测定步骤 萃取 准确称取 5 g 新鲜紫花苜蓿样品（精确到 0.01g）或 2 g 草粉（精确到 0.01g）放入 50 mL 塑料离心管中，加入 30 mL甲醇-碳酸钠溶液（5.10），混合均匀，超声提取30分钟，用磷酸溶液（5.11））调pH=2. @> 5. 4000 r/min 离心 10 min，收集上清液于分液漏斗中，用 50 mL 二氯甲烷萃取两次（5.4） (25 mL+25 mL)，2 加入去水后的有机相中加入适量无水硫酸钠（5.7），

1 相液相色谱测定参考条件 液相色谱测定参考条件如下： a) 色谱柱：C18型柱，长150 mm，内径3.9 mm，粒径5 m，或等效柱；b) 流动相：A: 乙酸 (5.14）+B: 乙腈 (5.1）@>= 60+40(v/v); c) 流速: 1.0 毫升/

10、分钟；d) 注射量：10.00 L；e) 柱温：40℃；f) 检测波长：258 nm。8.3.2 根据8.3.1的测定条件制作标准曲线，标准工作溶液（5.18）@ > 注入高效液相 测量相应的峰面积，以标准工作溶液的浓度（5.18）@>为横坐标，峰面积为纵坐标色谱纯甲醇色谱纯甲醇，画出标准品8. 3.3 样品溶液的测定 根据8.3.1的测定条件，将待测样品溶液注入高效液相色谱仪中测试。待测样品溶液中目标物质的响应值应在仪器的线性范围内，否则应适当稀释。标准工作溶液和待测样品溶液以等体积进样。根据标准溶液色谱峰的保留时间和峰面积，根据保留时间定性测定样品溶液的色谱峰。，外标法定量。咪草烟标准溶液的色谱图见附录 A。根据标准溶液色谱峰的保留时间和峰面积，根据保留时间定性测定样品溶液的色谱峰。，外标法定量。咪草烟标准溶液的色谱图见附录 A。根据标准溶液色谱峰的保留时间和峰面积，根据保留时间定性测定样品溶液的色谱峰。，外标法定量。咪草烟标准溶液的色谱图见附录 A。

11、A.1。平行实验 按照上述步骤，对同一样品进行平行实验。除样品不称重外，按上述分析步骤进行空白实验。9、结果的计算和表示 样品X中咪草烟的含量按公式计算（1）@>：X= (CC0）V(1)m 式中： X 样品中咪草烟 3C 待测溶液中咪草烟浓度，g/mL；C0 试剂空白；V 样品溶液的定容，mL；m 样品称量样品量，g。 注：测定结果以算术平均值表示，四舍五入至两位有效数字。10 精密度 在实验室内重现性条件下获得的 2 次独立测定结果之间的绝对差值不超过算术平均值的 10%。在实验室间重现性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。4AA 附录A（资料性附录） 高效液相色谱法测定咪草烟标准溶液 溶液的典型色谱图见图A.1。图 A.1 咪草烟标准溶液高效液相色谱法的典型色谱图 5 在实验室间重现性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。4AA 附录A（资料性附录） 高效液相色谱法测定咪草烟标准溶液 溶液的典型色谱图见图A.1。图 A.1 咪草烟标准溶液高效液相色谱法的典型色谱图 5 在实验室间重现性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。4AA 附录A（资料性附录） 高效液相色谱法测定咪草烟标准溶液 溶液的典型色谱图见图A.1。图 A.1 咪草烟标准溶液高效液相色谱法的典型色谱图 5