色谱纯甲醇 石药集团：石药集团河北中润制药有限公司实习报告级生工30901校内指导

学院药业集团河北中润药业有限公司实习后技术总结报告-简介石药集团河北中润药业有限公司位于河北省省会石家庄市。注册地址石家庄市丰收路47号。它是世界领先的抗生素原料供应商。公司成立于1989年，是石药集团控股的香港中国医药集团有限公司的境内投资子公司，是一家中外合资企业。公司现有员工3200余人，均接受过严格的GMP知识和制药技能培训，具备不断创新的能力。中润是中国国内最大、外资最多的医药企业。公司拥有青霉素、头孢菌素、生物酶、碳青霉烯类四大系列40多个产品。青霉素系列产品主要包括青霉素钾工业盐、青霉素钾、青霉素钠、6-APA、阿莫西林、氨苄青霉素、氨苄西林钠，产能和市场占有率均居世界抗生素前列。头孢菌素系列主要包括中间体7-ACA、头孢曲松钠、头孢唑啉钠、头孢哌酮钠、头孢噻肟钠等，旗舰产品7-ACA年产能居世界第一。中润也是唯一一家拥有锌盐化学法、钠盐化学法和酶法三种工艺生产7-ACA的企业。每小时氨氮测定。

成分中氨氮、总糖、还原糖和氨基氮的测定；模组实验：测定生产过程中发酵液的效价和杂质；萃取组实验：测定结晶位置的脱脂液、稀释液的水分、滴度、pH值；精制位FAB、钠盐母液、钠盐转化液、转化位钠盐溶液等样品的效价、水分和含量；丁醇、丁醇水、无菌室乙酯、乙酯水、钠盐母液水分、效价、PH测定丁醇、丁酯、乙酯半成品、成品酯化产品、酯化切割头、废乙酯酯含量水分和含量；原料; : 玉米浆、原料、液态糖聚合物等的含量、总氮、干物质、折光率等。 目录第一章青霉素钠中间体一.钠盐溶液的测定…………………… ……………………………………………………1 二.钠盐转化溶液的测定…………………………………………………… …………………………1 三.钠盐结晶母液的测定………………………………………………………………………………………………………………………… 1 第二章Positions 一. 炼油实验室的测量项目……………………………………………………………… 2 二.实验使用的仪器…… ……………………………………………………………………2 三.成品丁酯的测定……………………………………………… ……………………………………2 四.硫酸含量测定………………………………………………………………3 五.Na2CO3含量的测定…………………………………………………………………… 3 六.脱脂液的测定…………………… …………………………………………………………3 七.稀释剂的测定……………………………………………………………… …………3 八.丁醇结晶母液的测定…………………………………………………………………………4 第三章青霉素效价和苯乙酸残留量的测定…………………………………… ………………5 一.仪器和材料………………………………………………………………………………5 二.测量步骤…………………………………………………………………………5 三. 仪器的维护与正确使用……………………………… ………………………………………7 四.流动相的制备…………………………………………………………………… …… 11 五.测量过程中遇到的问题…………………………………………………………11 第四章结论…………………………………… ………………………………………………12 第五章实践经验……………………………………………………………………………………13 第一章青霉素钠中间体 第一节钠盐溶液的测定1.效价：取10ml样品溶解于100ml容量瓶中，加纯净水稀释至刻度，摇匀，使用制备好的样品，装满样品，放入容器中旋光仪测量旋光度；公式：效价(μ/ml) = α 558010 2.水分：取样20μ，注入自动水分滴定仪中测量并读取显示屏上的数据；第二节钠盐转化溶液的测定1.方法：取试样10ml溶解于100ml容量瓶中，加纯净水稀释至刻度，摇匀，使用制备好的试样，加满样品放入旋光仪测量旋光度；公式：/ml) =α575010 注入自动水分滴定仪测量并读取显示屏上的数据； 3.PH：用纯净水冲洗电极，用滤纸擦干，放入样品中测量pH值，读取显示屏上的数据； 4.K：在滴定板上取两滴样品，加一滴亚硝酸钴钾，判断：有黄色漂浮或黄色沉淀，证明有K，判断为不合格，没有变化，证明没有K色谱纯甲醇，判断合格；第三节钠盐结晶母液的测定1.层级：取样品10ml溶解于100ml容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，使用制备好的样品，装满样品，放入旋光仪中测定旋光度；公式：效价（μ/ml）=α55802. 水分：取样20μ，注入自动水分滴定仪测量，读取显示屏上的数据；第二章精炼岗位第一节精炼实验室测量项目1.回收岗位：丁醇、丁酯、酯化产品、乙酯半成品、废乙酯、酯化切割头； 2.无菌室：丁醇、丁醇水、乙酯、乙酯水、结晶母液、转化液； 3.过滤：乙醇、乙酯； 4.精炼：FBA、乙酯、硫酸； 5.碱化：FBA、Na2CO 3、K2CO3； 6.结晶：脱脂液、稀释剂7.制备：纯净水； Section 2 水分滴定仪、旋光仪、电导仪、高效气相色谱 Section 3 成品丁酯1.的测定水分检测：准确吸取20μ的样品，然后按下START按钮，然后在将样品快速注入水分阳极池，滴定仪开始滴定并显示结果，水分滴定仪编号MEB08445，水分%=0.01%水分%=0.01 %，两次的平均值=0.01%。

内控标准水分0.5%，结论：合格。颜色等级测定：取25ml澄清透明样品于250ml比色管中，与铂钴标准比色溶液比较，得到结果，颜色等级=No. 5、铂钴标准比色溶液批号13-S-Co-101201 内控标准色级20，倍率提高到110，检测器温度200，进样口温度200，进样量0.3μl，气相色谱号为C，色谱柱号为us8802935H，色谱符号为D。酒精12，正丁醇含量=63.36%正丁醇和乙酸丁酯含量= 99.72%，其他单一杂质含量=0.06%，内标标准丁醇含量为65.0%，乙酸正丁醇含量之和为9 8.0%，其他单一杂质含量为0.5%。结论：不合格。第四节 硫酸含量测定操作过程：抽取样品1ml，加纯净水约30ml，加入酚酞指示剂滴，用氢氧化钠滴定至微红色滴；计算公式：含量% = VNaOHCNaOH 049 100% 合格标准品 14.00～18.00% 第五节 Na2CO3 含量的测定 操作过程：精密吸取1ml样品于锥形瓶中，加入30ml纯净水，加甲基橙指示剂2滴，用盐酸滴定，滴定至棕红色为终点；计算公式：含量% = VHClCHCl 053 100% 鉴定标准：5.00～15.00% 第六节脱脂溶液的测定1.层级：吸出样品5ml溶解于50ml容量瓶，加纯净水稀释至刻度，摇匀，使用制备好的样品，装满样品放入旋光仪中测定旋光度；公式：效价（μ/ml）=α5580102.酯含量：取1ml过滤后的样品，加入10ml 1mol/L氢氧化钠和10ml中性乙醇，静置20min，加入0.5%酚酞2滴，用0.500mol/L盐酸滴定；公式;酯含量%=样品盐酸盐酸-效价空白-100% 第7节稀释剂效价测定：取样品5ml溶解于50ml容量瓶中，加纯净水稀释至刻度，摇匀好，用准备好的558010 PH：用纯净水冲洗电极，用滤纸擦干，放入样品中测PH值，读取显示屏第八节丁醇结晶母液1.层：用过滤后的样品冲洗旋光管2-3次，装满样品放入旋光仪中测量旋光度；公式：滴度（μ/ml）=α55802. 水分：取样20μ注入自动水分滴定仪测量并读取显示屏上的数据；第三章发酵液中青霉素滴度和苯乙酸残留量的测定（高效液相色谱法） 第一节仪器和材料1.仪器 Agilent HPLC、Dionex HPLC、Waters515 LC； 2.材料401~415 15个大发酵罐 307~310 4个中间发酵罐的青霉素发酵液，30个2、306小发酵罐的青霉素发酵液；第二节 测定步骤 1.1 原理：使用高压进液 泵将流动相通过含有固定相的色谱柱，通过进样器进入样品中。

由流动相带入色谱柱。色谱柱中的组分分离后，依次进入检测器，变成电信号，由化学工作站记录为色谱峰和数据。 1.2 仪器和试剂：高效液相色谱仪、电子天平、超声波清洗机、溶剂过滤器、pH计、C18色谱柱、1ml移液器、2ml移液器、烧杯、量筒、50ml容量瓶、100ml容量瓶、注射器、0.45μ微孔膜、甲醇（色谱纯）、磷酸二氢钾（分析纯）、磷酸（分析纯）。 1.3 磷酸盐缓冲液的试剂配制：称取68g磷酸二氢钾于烧杯中，加1000ml纯化水溶解，摇匀，用磷酸调pH至3.5，得68g/L 磷酸二氢钾缓冲液。 5%甲醇水：用量筒量取50ml色谱纯甲醇和950ml纯化水，混匀，用0.45μ滤膜过滤备用。流动相：使用68g/L磷酸二氢钾溶液-纯化水-甲醇（100:500:400）为流动相，通过0.45μ微孔膜过滤使用。1.4色谱条件 色谱柱：0DS，5μm，250mm4.6mm 流速：1.0ml/min 检测波长：225nm 进样量：20μ 柱温：301.5 系统适用性测试：进样参比溶液依次进入高效液相色谱仪，记录苯乙酸和青霉素的色谱峰洗脱顺序，色谱峰之间的分离度应大于1.5，记录峰面积计算RSD，RSD苯乙酸峰面积小于10.0%，青霉素峰面积RSD小于2.0% 1.6 操作流程1.< @6. 1 对照品溶液的制备：精密称取苯乙酸对照品25mg于50ml容量瓶中，稀释e 加水至刻度，制成原液A；准确称取青霉素对照品25mg于50mg容量瓶中，加纯净水溶解；准确吸取0.5ml原液至容量瓶中，加纯净水稀释至刻度，摇匀。

1.6.2 试液制备：根据发酵液的生长周期，参照下表得到过滤后的发酵液，准确量取相应的量。置于规定体积的容量瓶中，加纯净水溶解并稀释至刻度，摇匀。估计单位 (μ ml) 稀释倍数 取发酵液的毫升数 容量瓶容量 (ml) 60000 以下 50 10060000 100 100 以上 将参比溶液通过0.45μ注入液相色谱仪。连续进样两次，记录色谱峰面积，将供试液通过0.45μ注入液相色谱仪色谱纯甲醇，记录色谱峰面积。 1.7 计算结果1.7.1 青霉素滴度（μ/ml） 样品对照 1136 对照：青霉素钾对照品的质量 g1598：青霉素钾的理论滴度1.@ >1136：青霉素钾与青霉素的分子量之比 P：青霉素对照品的含量 μ g/ml) 苯乙酸含量 = 5000 100 对照样品 样品对照：苯乙酸对照品的质量 mgP：苯乙酸的含量对照品 样品：样品5000的稀释比例：苯乙酸标准品的稀释比例1. 8 高效液相色谱仪操作注意事项，请参见《高效液相色谱仪操作和维护规程》。用于滴度检测的样品应用于氨氮和氨基氮分析。用移液器转移样品时，用滤纸擦拭。然后设置比例。

第三节仪器维护与正确使用Waters515液相色谱仪操作维护程序仪器介绍1.1 本仪器由515泵、waters2487检测器、进样系统、计算机色谱工作站、打印机等组成。 1.2 制造商：美国沃特世公司1.3 技术规格 流量精度：0.1%RSD 流量精度：0.1% (f=1ml/min.methanol , pressure为1000～2000psi 波长精度：n/m 波长重复性：0.10NM 漂移：1.010ˉ4AU/hour/（245nm预热1小时） 噪声：单波长0. 3510ˉ5AU（干电池） , 时间常数在254nm1.0） 2waters液相色谱仪环境要求2.1 通风良好，严禁静电； 2.2 避免阳光直射； 2.3放置在一起的台面应水平无振动；2.4 环境温度：10~30 应无大波动；2.5 相对湿度：20~90% 3waters 液相色谱仪使用3. 1 样品制备3.1.1 液相色谱仪使用前应准备好0.45μ微孔滤膜，脱气纯化水、流动相（以下简称水、流动相）和色谱仪极纯的甲醇（简称甲醇）3.1.2 调整检测器的检测波长3.2 开始制备3.2.1 打开电源泵、检测器、显示器、微机依次排列； 3.2.2 将吸滤器放入装满水的储液瓶中并密封； 3.2.3 打开泵上的清洗旋钮，用针头从出液口抽出约10ml的液体，关闭清洗旋钮。

3.2.4 用水更换洗涤柱，转动泵旋钮并按MENLV键，当泵显示PURGE时，按RUN/STOP键排气。当流路中没有气泡时，按RUN/STOP键停止排气并关闭泵头旋钮。并按RUN/STOP键运行泵，从泵面板按EDIT键，从小到大输入流量值XXXml/min。 3.2.5 流量达到设定流量后，泵应运行30分钟左右，然后将流量由大变小至0.01ml/min。将吸滤器从水中取出，放入流动相储液瓶中。并封好瓶口，流速从0.0ml/min逐渐增加到设定流速3.3系统运行3.3.1微电脑进入显示系统，用鼠标点击启动程序millenniu32指向oracle文件中的启动数据库，或者直接输入设置的密码进入系统主操作。 3.3.2 双击 Millenmin32 图标，点击登录，输入用户名 xxx 和密码 xxx，点击确定。 3.3.3 在项目中选择cfc，双击run samples，在run samples 中选择waters-2487 ok3.3.4 点击single，在sample name 中输入sample 否.，在inject sample me set in function中选择2478，在RUN TIME中输入预定的sample运行时间，在injection vocume中设置10.0 3.3.5，选择RUN processcontinue fault in右上角点击监视器预览基线，等待泵显示稳定压力，屏幕显示的基线噪音水平满足要求（约30分钟）3.3.6 点击注入打开后，红灯停止并单击注入。显示单次注射等待时，即可开始注射。

3.4 进样测量3.4.1 将预分析的样品经过一定的处理，放入干净的小瓶中，样品用于清洗进样针几次。当手动进样器处于进样位置时，取另一份样品溶液并插入进样针。将扳手手柄推至加载位置并推动样品溶液，并快速将扳手手柄转动至进样位置3.4.2 液相色谱仪开始测量样品并自动记录光谱3.5 数据处理：用 测量完成后，打开 Milleenninm32 的主屏幕，选择 Browse project，选择 YYY 并点击 ok。在channels中选择样品名称后，点击rerenl显示光谱然后积分，点击peaks得到处理后的结果进行计算； 3.6 关机操作3.6.1 测量结束后，关闭探测器电源； 3.6.2 关闭色谱工作站，一一关闭所有打开的窗口，然后关闭主机和显示器的电源； 3.6.3 将流动相换成甲醇水，操作同3.2.4-3.2.5，洗上柱约30min，换上甲醇洗柱60min，关掉515泵电源； 3.6.4 清理液相色谱仪及周围卫生罩； 3.6.5 认真填写《液相色谱仪和气相色谱仪使用记录》和《检验设备维护记录》 4 沃特世液相色谱仪注意事项4.1 仪器室应保持通风、清洁; 4.2 各种液体（水、流动相）和进样用的样品溶液必须经过0.45微米微孔膜、即用型储液瓶严格过滤液体要定期清洗，保证清洁，防止仪器污染；4.3不锈钢吸滤器要经常用超声波清洗，过滤头也要定期清洗。

先用干净的纯净水半小时以上，再换柱洗水半小时以上，安装时不要接触滤头，以免污染滤头； 4.4 洗柱水不能长期存放。如有异物，应使用新配置； 4.5 为了延长探测器氘灯的使用寿命，建议测量完成后关闭探测器电源，不要频繁开关电源在使用过程中。当氘灯达到使用寿命时，应及时更换； 4.6 测定后色谱柱应分别用甲醇水和甲醇清洗，防止结晶，延长仪器和色谱柱的使用寿命； 4.7 液相色谱仪使用过程中应随时记录使用情况，包括色谱柱的使用情况（如柱型、柱压）和色谱柱的峰输出（如保留时间、峰面积等）4.8 液相色谱仪在使用过程中需要注意观察。如发现异常，应尽快处理。如出现重大故障，仪器无法工作，应及时与厂家联系；常见故障排除与维护5.1 泵维护5.1.1 使用尽可能干净的流动相； 5..1.2 进液口有沙子 应经常清洗滤头； 5.1.3 防止流动相交换时沉淀； 5.1.4 避免泵内堵塞和气泡； 5. 2进样器的维护：每次分析后，应反复冲洗进样器，防止样品交叉污染和系统压力过高； 5.3 立柱的维护5.3.1 立柱在任何情况下都不应碰撞、弯曲或强烈振动； 5.3.2 色谱柱连接色谱柱时，应清洗较宽的部分或管道； 5.3.@ >3 注意流动相的脱气； 5.3.4 避免使用高粘度溶剂作为流动相； 5.3.5 进样需要纯化； 5.3.6 严格控制注射量； 5.3.7 每天分析工作结束后清洗进样阀内的残留样品； 5.3.8 每天分析测定后，用合适的溶剂清洗色谱柱； 5.3.9 如果分析柱长期不用，应使用合适的有机溶剂密封保存； 5. 4 检测器的维护（UV）5.4.1 紫外灯的维护：分析前，色谱柱接近平衡时；打开检测器，分析完成后立即关闭检测器； 5.4.2 常见故障及解决方法也要留样管理6.1 手动进样阀5.6口泄漏时，检查阀芯密封圈是否转子损坏； 6.2如果系统压力超过设定值，系统将关闭。

首先检查流道内的管路是否破裂或液压变形，然后检查流道各段，按由近到远的原则确定堵塞位置。顺序为泵至进样器管路、进样器六通阀、色谱柱、检测器出口管。断开相应接口后，启动泵进行测试； 6.3 系统压力低、不稳定或无压力； 6.3.1 流路中有气泡，进行去气泡操作，将气泡排除； 6.3.2 流路有液体泄漏，检查并排除泄漏点。 6.3.3 进出口单向阀被污染，清洗或更换单向阀； 6.3.4 柱塞杆和密封圈磨损，更换柱塞密封或活塞杆塞杆，建议同时更换； 6.3.5喷油器六通阀定子或转子密封面磨损，更换定子或转子密封面； 6.3. 6 当流动相中有气体排空柱子时，设置流速0.2-0.5ml/min，用异丙醇清洗柱子直到压力稳定； 6.3.@ >7 如果流通池内有气泡，堵住排水管出口3～5秒后迅速放掉，重复操作直至压力稳定； 6.4 基线有噪音或基线不稳定6.4.1 如果流动相或流路被污染，检查并更换流动相，断开连接冲洗流路用于测试的色谱柱。如果故障不能排除，则可以判断流动相或流路被污染；如果色谱柱被污染，清洗或更换色谱柱，首先根据流动相的情况更换色谱柱中的流动相，并根据使用情况选择合适的溶剂清洗色谱柱2～3小时。相似相容性原则； 6.4.3 流路或检测器有气泡，排除气泡； 6.4.4 正负信号密集，流通池内充满空气排除空气； 6.4.5 压力波动，检查排除，清洗单阀有无泄漏； 6.4.6 基线漂移 检查室温或柱温箱温度，冷藏的流动相应置于室温并在使用前脱气；第四节 流动相 高效液相色谱仪使用的流动相由纯水、甲醇、磷酸二氢钾按541的比例组成。通常实验室每天需要配置2000ml流动相，纯化后的水和磷酸二氢钾必须抽真空 抽滤除去杂质，先用1000ml量筒称取1000ml纯净水，抽真空过滤后倒入5000ml试剂瓶中，再称取200ml磷酸二氢钾倒入真空过滤后的试剂瓶。最后量取800ml甲醇水倒入试剂瓶中，充分摇晃试剂瓶使其充分混合；第五节 测量过程中经常遇到的问题1.测量过程中应先称量青霉素标准品 称量前必须先校准电子天平。校准不当会导致青霉素标准品称量不准确。青霉素标准品应精确到小数点后四位。高标准将导致发酵液滴度的确定。过低，标准品过高，会导致发酵液偏高； 2.测量过程中应严格控制实验室温度。导致样品达峰时间温度过低会提前样品达峰时间，所以实验室温度一般保持在25℃左右；钾是按一定比例配制的，如果甲醇太高，样品的出峰时间会更早；第四章结语 我在104实验室实习半年，对实验室的工作有了很多了解。掌握实验室的各项工作，熟悉实验室的各种实验仪器；比如青霉素发酵液的前期工作：氨氮、氨基氮、还原糖、硫酸铵的测定，氨氮的测定需要水浴。水浴加热20分钟，A、B样品试管用橡胶管连接，A试管需放入水浴中，水浴温度80℃。气泡的产生会增加样品测量的误差；在测定苯乙酸的过程中，会使用离心机对样品进行离心分离，离心后样品分层。吸头不能伸出分层液面以下，否则会影响样品的测定；在青霉素滴度和苯乙酸残留量的测定过程中，称量青霉素标准品时，必须校准电子天平。发酵液效价的影响很大，往往会导致效价下降。 The titer can only rise but not fall, otherwise the sample must be repeated. There should be no air bubbles in the column of the high performance liquid chromatograph. Before sampling, check whether there are air bubbles in the machine. It is also necessary to strictly control the temperature and humidity of the laboratory. The temperature is generally controlled at about 25. The content of methanol in the mobile phase configuration should be strictly controlled, which will affect the peak time of the sample. When using a polarimeter to measure the optical rotation in the refining laboratory, it should be protected. The sodium lamp is good, the interior of the polarimeter should be kept clean, and the polarimeter tube should not leak, otherwise the measured optical rotation will be low.

When measuring moisture with a moisture titrator, the bubbles in the needle should be exhausted; when the raw material polymer is measured in liquid phase, the chromatographic column must be flushed with purified water first, and then flushed with the mobile phase for about 30 minutes. When injecting samples, the corn steep liquor is carbonized with concentrated sulfuric acid when measuring total nitrogen, and the reflux condition should be observed from time to time. Chapter 5 Internship Experience It has been eight months since I entered the Zhongrun Pharmaceutical Factory of CSPC. From the beginning, I didn't know how to operate it and now I am proficient in operation. During this period, I went through a period of learning and adaptation. Entering the laboratory is a counterpart job for us to study analysis. At school, we deal with the bottles and cans in the laboratory today. After coming to the laboratory, it is not unfamiliar. However, after these months of study, I have I have gained a lot of insight, which is in the laboratory of instruments that are not common or not seen in school, so that I have a lot of understanding of instrument analysis. The study of experiments in different positions has enabled me to learn a lot of knowledge and have a deep understanding of the properties and uses of many reagents. We are more familiar with the dangers of the laboratory. Most of the contacts in the laboratory are toxic and harmful gases and liquid reagents. For our own safety, we must know the degree of harm of these reagents. Working in the laboratory must have a firm grasp of the various positions in the laboratory to adapt to work rotation. Rotation is very important to us. Rotation is also an effective measure to deal with changes in laboratory personnel. If there is a shortage of positions, it should be rotated in time to ensure the normal progress of laboratory work. Laboratory personnel change frequently. I've gotten used to the lab work and I'll do better in the future.