“疏水”生物物理所等开发出新型冷冻电镜支持膜技术

今天，聚焦化工小新为大家分享来自生物物理研究所的《生物物理所等开发出新型冷冻电镜支持膜技术》。

12月14日，中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室孙飞课题组与南开大学生命科学学院分子微生物学与微生物工程实验室乔明强课题组合作，在Nature Communications上发表了题为A cryo-electron microscopy support film formed by 2D crystals of hydrophobin HFBI的研究成果。针对当前冷冻电镜样品制备过程中普遍存在的由于气液界面导致的样品变性、解聚和取向优势问题，该研究报道了一种用基于真菌疏水蛋白HFBI薄膜的新型冷冻电镜支持膜技术，为相关问题提出了有效的解决方案。

近年来，由于硬件和图像处理算法上的不断突破，冷冻电镜单颗粒技术已成为研究生物大分子复合体三维结构的主要研究手段之一，并已达到原子分辨率的水平。冷冻电镜技术流程中的关键步骤包括冷冻样品的制备，将生物大分子样品快速冷冻在玻璃态冰中，用于下一步的冷冻电镜成像。然而，实际研究工作中存在颗粒不进孔、分布不均匀、取向优势严重、蛋白质变性等问题，导致无法解析样品的高分辨率三维结构，成为利用冷冻电镜解析生物大分子复合体高分辨率三维结构的瓶颈。近年来的研究逐步明确了该问题的微观机理是源于传统冷冻制样过程中的气液界面效应，生物物理所生物大分子国家重点实验室章新政课题组近期对于该机理问题开展了研究(Journal of Structural Biology213, 107783)。孙飞课题组与生物物理所生物成像中心合作，围绕冷冻电镜样品制备技术，开发了微孔阵列碳支持膜GiG和微孔阵列非晶镍钛合金支持膜ANTA(Progress in biophysics and molecular biology160, 5-15)，相关技术产品用于冷冻电镜实际研究工作。在上述工作的基础上，孙飞课题组基于乔明强课题组制备的真菌疏水蛋白HFBI研发了全新的冷冻电镜支持膜HFBI-film，可有效解决由于气液界面效应导致的样品变性、解聚和取向优势问题，提高利用冷冻电镜技术解析生物大分子复合物高分辨率三维结构的通量与效率。

真菌疏水蛋白是一类由高等丝状真菌分泌的小分子量蛋白质(7-15kDa)，可在菌丝和孢子表面自组装形成两亲性蛋白膜，在真菌不同发育阶段中起到关键作用。疏水蛋白作为两亲性蛋白质，其表面展现出明显的疏水和亲水性区域，使疏水蛋白成为表面活性最强的蛋白质之一。良好的生物相容性、独特的自组装特性及高度的成膜稳定性使疏水蛋白被广泛用于食品乳化、药物递送、生物材料修饰和生物传感器等领域。疏水蛋白HFBI是一类由瑞氏木霉生产的II型疏水蛋白，可以在气液界面处自组装成单层、高度有序的二维晶体结构(图1)。

本研究中，科研人员利用疏水蛋白HFBI自组装形成的连续二维晶体薄膜来覆盖微孔阵列非晶镍钛合金膜载网(图2)，用于冷冻电镜样品制备。该载网天然亲水，无须做辉光放电处理，通过静电相互作用吸附蛋白颗粒来克服样品与气液界面接触的问题。该支持膜能够帮助形成更均匀更薄的玻璃态冰，背景衬度低，有利于高分辨率和高信噪比的冷冻电镜成像。研究人员用该载网解析了6种蛋白质的高分辨率冷冻电镜结构(图3)，包括两个在冷冻电镜实验中具有明显取向优势的蛋白质样品——过氧化氢酶catalase和流感病毒血凝素HA，分子量最小可达64 kDa。结果表明，该新型冷冻电镜支持膜载网可以有效解决气液界面效应，对不同分子量的样品具有广泛的适用性。此外，研究人员证明了该疏水蛋白膜是通过静电相互作用来吸附蛋白颗粒，这一相互作用可以改变样品溶液的pH值来进行调节，从而为后期使用该支持膜载网提供了明确的优化方向和手段。

研究工作得到国家重点研发计划、中国-瑞士科技合作项目、国家自然科学基金、中科院战略性先导科技专项(B类)和北京市科学技术委员会的支持。相关成果已申请中国发明专利。该工作的电镜数据收集工作均在生物物理所生物成像中心完成。

图1.真菌疏水蛋白生理功能及HFBI结构示意图

图2.疏水蛋白支持膜载网的制备流程图

图3.利用疏水蛋白支持膜载网所解析的冷冻电镜结构

好了，关于“疏水”生物物理所等开发出新型冷冻电镜支持膜技术就介绍到这。