所述清洗3后使用高压毛细管电泳分析仪的分析及处理

以下描述仅为本发明的示例性实施例，并非用于限制本发明的范围。任何本领域的技术人员在不脱离本发明的构思和原则的情况下，所作的任何等同变化、修饰和组合，均应包含在本发明的保护范围之内。

示例 1：

本发明检测人乳中人血清白蛋白含量的方法包括以下步骤：

(a)制备标准溶液并绘制标准曲线：

将人乳血清白蛋白标准品溶解于样品缓冲液中，制备浓度为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.125mg/ml的标准溶液。准确提取 40 μl 标准溶液，加入样品管中。超声波清洗3分钟后，使用高压毛细管电泳分析仪进行分析。积分后峰面积为1126587、575380、281421、136854、31120，软件得到标准曲线，线性回归相关系数0.9998，最低检出限0.1ng，最低检出量0.01mg/ml，标样回收率为90%。

(b)检测待测母乳：

将牛奶样品放入1.5ml离心管中，3000r/min离心8min，离心温度18℃，准确提取100μl置于2ml离心管（或其他容器中） ), 提取 100 μl 样品缓冲液到 2 ml 离心管中稀释 2 倍，并用涡旋混合器混合。准确提取上述处理后的样品40μl，加入样品管中，置于超声波清洗机中3分钟，然后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液的制备方法：在1体积份的140mmol/L三甲氨基甲烷缓冲液中加入1体积份的40mmol/L EDTA，1体积份的乙二胺四乙酸二钠。 6 mol/L 尿素，1 体积份 3 mg/ml 二硫苏糖醇，1 体积份 0.05% 甲基羟乙基纤维素，用氢氧化钠溶液调节 pH 至 8.5。

在上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳分析仪的电泳温度控制在25℃，直径50μm，长度200的包覆石英毛细管柱使用毫米，紫外线检测器和压力注入。压力0.8psi，时间5s，分离温度20℃，工作电压15kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的制备方法：柠檬酸盐缓冲液，pH值为3.0。

(c) 样本定量读数：

根据样品分离的色谱图，使用高压毛细管电泳分析仪的分析软件，综合人乳血清白蛋白的峰面积为50656，使用分析软件自动插入计算样品浓度的标准曲线方程为

@0.18mg/ml，稀释倍数乘以2，实际浓度为0.36mg/ml，所以人乳样品中的人乳血清白蛋白浓度为0.36g /L.

示例 2：

本发明检测人乳中人血清白蛋白含量的方法包括以下步骤：

(a)制备标准溶液并绘制标准曲线：

将人乳血清白蛋白标准品溶解在样品缓冲液中，制备浓度为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.0125mg/ml的标准溶液。准确提取 40 μl 标准溶液，加入样品管中。超声波清洗1分钟后，使用高压毛细管电泳分析仪进行分析。积分后峰面积为1036841、561235、263254、123254、3119，利用软件得到标准曲线，线性回归相关系数< @0.9976，最低检出限0.002μg，最低检出量0.02mg/ml，标样回收率为91%。

(b)检测待测母乳：

将人乳样品放入1.5ml离心管中，3000r/min离心10min，离心温度5℃，准确提取100μl置于2ml离心管（或其他容器），将 200 μl 样品缓冲液提取到 2 ml 离心管中，稀释 3 倍，并使用涡旋混合器充分混合。准确提取上述处理后的样品40 μl，加入样品管中，置于超声波清洗机中4 min，然后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液的制备方法：在1体积份150 mmol/L三甲氨基甲烷缓冲液中加入2份体积50 mmol/L EDTA，2份按体积计 7mol/L 尿素，按体积计 2 份 2mg/ml 二硫苏糖醇，按体积计 2 份 0.08% 甲基羟乙基纤维素，使用 0.1M 氢氧化钠调至 pH 8.5 .

在上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳仪的电泳温度控制在35℃，无涂层的石英毛细管柱，直径75μm，长度400使用毫米，紫外线检测器和压力注入。 ，压力0.6psi，时间8s，分离温度30℃，工作电压25kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的制备方法：柠檬酸盐缓冲液，pH值为2.5。

(c) 样本定量读数：

根据样品分离的色谱图，使用高压毛细管电泳分析仪的分析软件，综合人乳血清白蛋白的峰面积为32459，使用分析软件自动插入标准曲线方程计算样品浓度为

@0.1233mg/ml，然后将稀释倍数乘以3，实际浓度为0.3699mg/ml，因此人乳样品中所含的人乳血清白蛋白浓度为0.@ >3699g/L.

示例 3：

本发明检测人乳中人血清白蛋白含量的方法包括以下步骤：

(a)制备标准溶液并绘制标准曲线：

将人乳血清白蛋白标准品溶于样品缓冲液中，制备浓度为8mg/ml、4mg/ml、1mg/ml、0.25mg/ml、0.01mg/ml的标准溶液。准确提取 40 μl 标准溶液，加入样品管中。超声波清洗10分钟后，使用高压毛细管电泳分析仪进行分析。积分后峰面积为2365154、1126587、281421、62356、3012，利用软件得到标准曲线，线性回归相关系数< @0.9987，最低检出限0.2ng，最低检出限0.01mg/ml，标样回收率为91%。

(b)检测待测母乳：

将牛奶样品放入1.8ml离心管中，2000r/min离心12min，离心温度20℃，准确提取10μl置于1.8ml离心机中管（或其他容器），提取 100μl 样品缓冲液，加入 1.8ml 离心管中稀释 11 倍，用涡旋混合器充分混匀。精密提取上述处理过的样品10 μl，加入样品管中，置于超声波清洗机中1 min，然后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液的制备方法：在160 mmol/L的三甲氨基甲烷缓冲液1体积份中加入10体积份的60 mmol/L EDTA，10 8 mol/L 尿素，10 体积份 2 mg/ml 二硫苏糖醇，10 体积份 0.02% 甲基羟乙基纤维素血清白蛋白浓度，使用氢氧化钠溶液 调节 pH 至 8.2 .

上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳仪的电泳温度控制在20℃，直径为20μm，长度为500的涂层石英毛细管柱使用毫米，紫外线检测器和压力注入。压力1 psi，时间1 s，分离温度35℃，工作电压10 kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的制备方法：柠檬酸盐缓冲液，pH值为2.0。

(c) 样本定量读数：

根据样品分离的谱图，使用高压毛细管电泳分析仪的分析软件，积分人乳血清白蛋白的峰面积为9005，使用分析软件自动插入计算样品浓度的标准曲线方程为

@0.032mg/ml，然后将稀释倍数乘以11，实际浓度为0.352mg/ml，因此人乳样品中所含的人乳血清白蛋白浓度为0.@ >352g/L.

示例 4：

本发明检测人乳中人血清白蛋白含量的方法包括以下步骤：

(a)制备标准溶液并绘制标准曲线：

将人乳血清白蛋白标准品溶解在样品缓冲液中，制备浓度为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.0125mg/ml的标准溶液。准确提取 40 μl 标准溶液，加入样品管中。超声波清洗5分钟后，使用高压毛细管电泳分析仪进行分析。积分后峰面积为1326587、595380、301421、126854、2521，使用软件得到标准曲线，线性回归相关系数< @0.9982，最低检出限0.2ng，最低检出量0.01mg/ml，标样回收率为91%。

(b)检测待测母乳：

将牛奶样品放入2ml离心管中，5000r/min离心10min，离心温度15℃，然后准确提取200μl放入2ml离心管（或其他容器）中，提取200μl样品缓冲液加入 2ml 离心管中稀释 2 倍并用涡旋混合器混合。精密提取上述处理过的样品100μl，加入样品管中血清白蛋白浓度，置于超声波清洗机中10min，然后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液配置方法：在1体积份150mmol/L三甲氨基甲烷缓冲液二钠、1体积份7mol/L尿素中加入1体积份60mmol/L EDTA , 1 体积份 4mg/ml 二硫苏糖醇，1 体积份 0.1% 甲基羟乙基纤维素，用氢氧化钠溶液调节 pH 至 8.8。

在上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳仪的电泳温度控制在40℃，直径75μm，长度600的无涂层石英毛细管柱使用毫米，紫外线检测器和压力注入。 ，压力0.1psi，时间15s，分离温度40℃，工作电压30kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的制备方法：柠檬酸盐缓冲液，pH值为3.0。

(c) 样本定量读数：

根据样品分离的谱图，使用高压毛细管电泳分析仪的分析软件，整合的人乳血清白蛋白峰面积为57269，分析软件自动插入标准计算样品浓度的曲线方程为

@0.19mg/ml，然后将稀释倍数乘以2，实际浓度为0.38mg/ml，所以人乳样品中所含的人乳血清白蛋白浓度为0.@ >38g/L.

示例 5：

人乳中人血清白蛋白含量的检测方法包括以下步骤：

(a)制备标准溶液并绘制标准曲线：

将人乳血清白蛋白标准品溶解在样品缓冲液中，制备浓度为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.0125mg/ml的标准溶液。准确提取 40 μl 标准溶液，加入样品管中。超声波清洗5分钟后，使用高压毛细管电泳分析仪进行分析。积分后峰面积为1241541、536741、243852、135421、2569，使用软件得到标准曲线，线性回归相关系数< @0.9939，最低检出限0.2ng，最低检出限0.02mg/ml，标样回收率为90%。

(b)检测待测母乳：

使用与实施例 4 相同的待测母乳。将牛奶样品加入2ml离心管中，5000r/min离心10min，离心温度15℃，准确提取200μl置于2ml离心管（或其他容器）中，提取200μl样品缓冲液，加入2毫升离心机。在管中稀释 2 倍并使用涡旋混合器混合。精密提取上述处理过的样品100μl，加入样品管中，置于超声波清洗机中10min，然后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液配置方法：在1体积份150mmol/L三甲氨基甲烷缓冲液二钠、1体积份7mol/L尿素中加入1体积份60mmol/L EDTA , 1 体积份 4mg/ml 二硫苏糖醇，1 体积份 0.1% 甲基羟乙基纤维素，用氢氧化钠溶液调节 pH 至 8.8。

在上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳仪的电泳温度控制在40℃，直径75μm，长度600的无涂层石英毛细管柱使用毫米，紫外线检测器和压力注入。 ，压力0.1psi，时间15s，分离温度40℃，工作电压30kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的制备方法：柠檬酸盐缓冲液，pH值为5.0。

(c) 样本定量读数：

根据样品分离的谱图，使用高压毛细管电泳分析仪的分析软件，整合的人乳血清白蛋白峰面积为48227，分析软件自动插入标准计算样品浓度的曲线方程为

@0.16mg/ml，稀释倍数乘以2，实际浓度为0.32mg/ml，所以人乳样品中的人乳血清白蛋白浓度为0.32g /L.

在同一待测母乳样品中，本发明采用的检测方法可以检测出实施例4中的0.38mg/ml，而根据公开专利方法的电泳缓冲液的pH值更大比<@ 以3.0为例，本例中pH值设置为5.0，只能检测到0.32mg/ml，检出率降低1< @5.79%。因此本发明更为准确。

示例 6：

人乳中人血清白蛋白含量的检测方法包括以下步骤：

(a)制备标准溶液并绘制标准曲线：

将人乳血清白蛋白标准品溶解在样品缓冲液中，制备浓度为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.0125mg/ml的标准溶液。准确提取 40 μl 标准溶液，加入样品管中。超声波清洗5分钟后，使用高压毛细管电泳分析仪进行分析。积分后峰面积为1124573、501235、248672、123241、2391，使用软件得到标准曲线，线性回归相关系数< @0.9974，最低检出限0.2ng，最低检出限0.02mg/ml，标样回收率为90%。

(b)检测待测母乳：

使用与实施例 4 相同的待测母乳。将牛奶样品加入2ml离心管中，5000r/min离心10min，离心温度15℃，准确提取200μl置于2ml离心管（或其他容器）中，提取200μl样品缓冲液，加入2毫升离心机。在管中稀释 2 倍并使用涡旋混合器混合。精密提取上述处理过的样品100μl，加入样品管中，置于超声波清洗机中10min，然后用高压毛细管电泳分析仪进行测定。

上述步骤(a)和(b)中，处理样品缓冲液配置方法：在1体积份150mmol/L三甲氨基甲烷缓冲液二钠、1体积份7mol/L尿素中加入1体积份60mmol/L EDTA , 5ul/ml β-巯基乙醇 1 体积份，0.1% 甲基羟乙基纤维素 1 体积份，用氢氧化钠溶液调节 pH 值至 8.8。

在上述步骤(a)和(b)中，高压毛细管电泳仪的电泳温度控制在40℃，直径75μm，长度600的无涂层石英毛细管柱使用毫米，紫外线检测器和压力注入。 ，压力0.1psi，时间15s，分离温度40℃，工作电压30kV。

上述步骤(a)和(b)中，电泳缓冲液的制备方法：柠檬酸盐缓冲液，pH值为3.0。

(c) 样本定量读数：

根据样品分离的谱图，使用高压毛细管电泳分析仪的分析软件，整合的人乳血清白蛋白峰面积为26110，使用分析软件自动插入代入标准曲线方程，计算样品浓度为

@0.105mg/ml，然后将稀释倍数乘以2，实际浓度为0.21mg/ml，因此人乳样品中所含的人乳血清白蛋白浓度为0.@ >21g/L.

在同一待测母乳样品中，本发明采用的检测方法可检测出实施例4中0.38mg/ml，根据已公开的专利方法，该检测方法含有β-巯基乙醇用来。样品缓冲液只能检测0.21mg/ml，检测率降低44.74%，因此本发明的检测结果更加准确。

以上列举的一系列详细说明，仅为对本发明可行实施例的具体说明，并不用于限定本发明的保护范围。凡在不脱离本发明的技术精神的前提下所作的等同替换或修改，均应包含在本发明的保护范围之内。